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PC-3M1E8細(xì)胞,PC-3M1E8細(xì)胞株

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 產(chǎn)品時(shí)間:2025-08-07
  • 簡(jiǎn)要描述:PC-3M1E8細(xì)胞,PC-3M1E8細(xì)胞株;中文名稱:人前列腺癌細(xì)胞高轉(zhuǎn)移亞系;慧穎生物提供,狀態(tài)良好,質(zhì)量穩(wěn)定,無(wú)支原體,無(wú)污染,符合標(biāo)準(zhǔn)。索取該產(chǎn)品的詳細(xì)資料,價(jià)格,復(fù)蘇周期以及售后服務(wù)等。
  • 產(chǎn)品簡(jiǎn)介

關(guān)鍵詞:慧穎生物提供高品質(zhì)PC-3M1E8細(xì)胞,PC-3M1E8細(xì)胞,狀態(tài)良好,傳代次數(shù)靠前,*!

產(chǎn)品名稱:PC-3M1E8細(xì)胞

中文名稱:人前列腺癌細(xì)胞高轉(zhuǎn)移亞系

規(guī)格:凍存管/25T培養(yǎng)瓶

貨期:10個(gè)工作日左右

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn):無(wú)支原體,無(wú)污染

上海慧穎生物提供4000多種類細(xì)胞株細(xì)胞系,從源頭把控產(chǎn)品的可靠性,復(fù)蘇,凍存,傳代,培養(yǎng),嚴(yán)格無(wú)菌操作,全國(guó)各地均可發(fā)貨,遠(yuǎn)到香港,澳門,內(nèi)蒙古,新疆石河子,寧夏,海南等地,全國(guó)訂購(gòu):!

原代細(xì)胞培養(yǎng)成功以后,需要進(jìn)行分離培養(yǎng),否則細(xì)胞會(huì)因生存空間不足或密度過(guò)大,營(yíng)養(yǎng)障礙,影響細(xì)胞生長(zhǎng)。細(xì)胞由原培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)分離稀釋后傳到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的過(guò)程稱之為傳代培養(yǎng)。傳代細(xì)胞允許培養(yǎng)的細(xì)胞擴(kuò)增(形成細(xì)胞株),可以進(jìn)行細(xì)胞克隆,易于保存,但可能喪失一些特殊的細(xì)胞和分化特征。傳代PC-3M1E8細(xì)胞,PC-3M1E8細(xì)胞形成細(xì)胞株的zui大利處在于提供了大量持久的實(shí)驗(yàn)材料,便于實(shí)驗(yàn)。1. 操作步驟(1)吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液。(2)向瓶?jī)?nèi)加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆蓋培養(yǎng)瓶底為宜。(3)置37℃孵箱或室溫(25℃溫度)下進(jìn)行消化,2~5min后把培養(yǎng)瓶放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察,當(dāng)發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮、細(xì)胞間隙增大后,應(yīng)立即中止消化。(4)吸出消化液,向瓶?jī)?nèi)加入Hanks液少量,輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶,把殘留消化液沖掉,然后再加培養(yǎng)液。如果僅使用胰蛋白酶消化,在吸除胰蛋白液后,可直接加入少量含血清的培養(yǎng)液,終止消化。(5)使用彎頭吸管,吸取瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液,按順序反復(fù)輕輕吹打瓶壁細(xì)胞,使之從瓶壁脫離形成細(xì)胞懸液。吹打時(shí)動(dòng)作要輕柔,以防用力過(guò)猛損傷細(xì)胞。(6)用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后,分別接種于新的培養(yǎng)瓶中,置CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。(7)細(xì)胞培養(yǎng)換液時(shí)間應(yīng)根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài)和實(shí)驗(yàn)要求來(lái)確定。一般2~3d后應(yīng)換一次生長(zhǎng)液。待細(xì)胞鋪滿器皿底面,即可使用;也可繼續(xù)傳代擴(kuò)大培養(yǎng)或換成維持液。2. 注意事項(xiàng)(1)掌握好細(xì)胞消化的時(shí)間,消化時(shí)間過(guò)短時(shí),細(xì)胞不宜從瓶壁脫落,過(guò)長(zhǎng)的消化會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞脫落、損傷。(2)掌握好消化濃度,當(dāng)消化液濃度過(guò)高時(shí),消化時(shí)間應(yīng)縮短,過(guò)低時(shí)細(xì)胞消化時(shí)間相對(duì)延長(zhǎng)。三、體內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)及其操作步驟1. 瘤細(xì)胞懸液接種(1)無(wú)菌選取生長(zhǎng)良好(有光澤,淡紅色)瘤組織或?qū)?shù)生長(zhǎng)期培養(yǎng)瘤細(xì)胞。   (2)在PBS中將瘤組織剪碎后用勻漿器研磨,經(jīng)80~100目篩網(wǎng)過(guò)濾成細(xì)胞懸液。(3)培養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)用PBS洗兩遍。(4)計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度至107~108/ml。(5)常規(guī)消毒后,于接種部位(通常為背部或腋窩腹股溝皮下)用醫(yī)用注射器皮下潛行一段后注入細(xì)胞懸液(0.1ml/部位,>106細(xì)胞)。初次接種成功率低,細(xì)胞數(shù)盡可能多一些。(6)次日注意觀察動(dòng)物一般情況。初次接種一般有一段較長(zhǎng)的潛伏期,以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短,zui后固定為一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的時(shí)間。2. 腹水瘤的建立與腹水瘤的接種 將實(shí)體瘤細(xì)胞直接種于小鼠腹腔、腹壁或其他部位,引起腹水,腹水中含有瘤細(xì)胞,將這種腹水反復(fù)傳代,即可成為腹水瘤。初次傳代時(shí),腹水常呈血性(含大量紅細(xì)胞),反復(fù)傳代后腹水逐漸變成乳白色。腹水瘤的接種過(guò)程如下。(1)將凍存或培養(yǎng)的腹水瘤細(xì)胞離心和洗滌,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。(2)消毒動(dòng)物,左下腹穿刺接種106腹水瘤細(xì)胞。(3)接種腹水瘤細(xì)胞后約7~12d,待小鼠腹部明顯膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部,用9號(hào)針頭抽取腹水,也可行腹部解剖后,用滴管吸取。每只小鼠可抽3~5ml。(4)抽取的腹水經(jīng)3000rpm離心15min,收集上清,分裝凍存?zhèn)溆谩K?、培養(yǎng)細(xì)胞的凍存及復(fù)蘇細(xì)胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù)。細(xì)胞凍存在-196℃液氮中,儲(chǔ)存時(shí)間幾乎是無(wú)限的。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的原則是慢凍快融。1. 凍存細(xì)胞(1)選對(duì)數(shù)增生期細(xì)胞(證明無(wú)支原體污染),在凍存前1d換液。(2)按常規(guī)方法把培養(yǎng)細(xì)胞制備成懸液,計(jì)數(shù),使細(xì)胞密度達(dá)5×107/ml左右密度,離心,去上清。(3)加入配制好的凍存液(培養(yǎng)液6.8ml,小牛血清2ml,DMSO 1ml,5.6%NaHCO3 0.1ml),按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細(xì)胞重懸。凍存細(xì)胞時(shí)培養(yǎng)液中加入保護(hù)劑10%二甲基亞砜(DMSO) 或甘油,可使冰點(diǎn)降低,使細(xì)胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細(xì)胞外。(4)分裝于無(wú)菌凍存管中,每管加1.5m懸液。(5)旋好凍存管并仔細(xì)檢查,一定要蓋緊,做好標(biāo)記。(6)凍存:在特殊的儀器或簡(jiǎn)易的液氮容器中,按-1℃/min的速度,在30~40min時(shí)間內(nèi),下降到液氮表面,再停30min后,直接投入液氮中。要適當(dāng)掌握下降冷凍速度,過(guò)快能影響細(xì)胞內(nèi)水分透出,太慢則促進(jìn)冰晶形成。操作時(shí)應(yīng)戴防護(hù)眼鏡和手套,以免液氮凍傷。2. 復(fù)蘇細(xì)胞(1)從罐中取出凍存管。(2)迅速放入36℃~37℃水浴,不時(shí)搖動(dòng),使其急速融化,30~60s內(nèi)完成。(3)凍存管用70%酒精擦拭消毒后,打開蓋子,用吸管將細(xì)胞懸液注入離心管中,再滴加10ml培養(yǎng)液。(4)低速離心(500~1000r/min) 5min,去上清后再用培養(yǎng)液洗一次。(5)用培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后,裝入培養(yǎng)瓶37℃培養(yǎng),次日更換一次培養(yǎng)液后,繼續(xù)培養(yǎng)。以后仍按常規(guī)進(jìn)行培養(yǎng)。凍存細(xì)胞數(shù)量要充分,密度應(yīng)達(dá)到107/ml,在融后稀釋20倍時(shí),仍能保持5×105/ml數(shù)量。

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PC-3M1E8細(xì)胞,PC-3M1E8細(xì)胞接種或傳代以后,實(shí)驗(yàn)者每天或至多間隔1~2d,要對(duì)細(xì)胞做常規(guī)性檢查。觀察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)情況以及培養(yǎng)的pH變化、有無(wú)污染等。根據(jù)細(xì)胞動(dòng)態(tài)變化,做換液或傳代處理,如發(fā)現(xiàn)異常情況應(yīng)及時(shí)采取措施。1. 細(xì)胞形態(tài) 生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞,在一般顯微鏡下觀察時(shí)可見(jiàn),細(xì)胞透明度大、折光性強(qiáng)、輪廓不清。細(xì)胞生長(zhǎng)不良時(shí),輪廓增強(qiáng),胞質(zhì)中常出現(xiàn)空泡、脂滴和其他顆粒狀物,細(xì)胞之間空隙加大,細(xì)胞形態(tài)可變得不規(guī)則甚至失去原有特點(diǎn),如上皮細(xì)胞變成類上皮細(xì)胞等。某些染料當(dāng)細(xì)胞死亡時(shí)能透過(guò)變性的胞膜與解體的細(xì)胞核DNA結(jié)合,而令其著色。因而常用臺(tái)盼藍(lán)(trypan blue) 鑒別細(xì)胞死活,活細(xì)胞不著色,死細(xì)胞核呈藍(lán)色。2. 細(xì)胞生長(zhǎng) 初代培養(yǎng)或傳代的細(xì)胞懸液接種以后,經(jīng)過(guò)長(zhǎng)短不同的潛伏期后開始增殖。傳代細(xì)胞系、胚胎組織或幼體組織一般在第二天即可見(jiàn)細(xì)胞生長(zhǎng),一周內(nèi)便可連接成片。接種細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶壁后,應(yīng)及時(shí)做再培養(yǎng)。否則由于營(yíng)養(yǎng)物消耗和代謝積累,細(xì)胞即進(jìn)入停止期或退化期。此時(shí)細(xì)胞輪廓增強(qiáng),細(xì)胞內(nèi)常出現(xiàn)顆粒狀堆積物,為膨脹的線粒體,細(xì)胞質(zhì)呈空泡化,細(xì)胞變圓、粗糙,嚴(yán)重時(shí)細(xì)胞從瓶壁脫落,只有及時(shí)再做傳代處理,才能使細(xì)胞繼續(xù)生長(zhǎng)繁殖。3. 營(yíng)養(yǎng)液 正常情況下,培養(yǎng)液呈桃紅色。如果細(xì)胞維持在pH6.5~6.6條件下,細(xì)胞會(huì)脫落死亡。當(dāng)培養(yǎng)液酸化變黃時(shí),說(shuō)明培養(yǎng)液中代謝產(chǎn)物已堆積到一定量,需要更換新鮮培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中如加Hepes或用5%CO2溫箱培養(yǎng)可使pH維持相對(duì)穩(wěn)定。更換營(yíng)養(yǎng)液的時(shí)間,可依營(yíng)養(yǎng)物的消耗而定,細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛時(shí)2~3d換一次,生長(zhǎng)緩慢時(shí),3~4d亦可。要特別注意各種細(xì)胞對(duì)pH值要求是不一樣的。4. 微生物污染 微生物污染培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)物后會(huì)出現(xiàn)pH值改變,培養(yǎng)液呈現(xiàn)混濁狀。細(xì)菌感染后,由于細(xì)菌的運(yùn)動(dòng),光鏡觀察可見(jiàn)有微閃光;真菌感染則在鏡下見(jiàn)許多細(xì)絲狀菌絲,有時(shí)還密集有群集孢子;支原體的污染需要借助一些檢測(cè)手段才可檢出。細(xì)胞污染以后一般應(yīng)當(dāng)廢棄,對(duì)于重要的細(xì)胞株,可以參考相關(guān)專著,介紹采取一些措施清除污染。比較重要的實(shí)驗(yàn)、珍貴的細(xì)胞,至少由兩個(gè)實(shí)驗(yàn)人員獨(dú)立培養(yǎng)操作,或由一個(gè)人分次(不同時(shí))操作。除培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的衛(wèi)生條件外,空氣中的濕度與微生物污染關(guān)系密切。重要的、周期長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)盡量安排在空氣濕度低的秋冬季進(jìn)行。

 

 

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