細胞名稱

 MHCC-97H人高轉移肝癌細胞

種屬

人

組織來源

肝

生長狀態(tài)

貼壁生長

細胞形態(tài)

上皮樣

培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基類型：DMEM（Hyclone SH30243.01)培養(yǎng)基

FBS（德國SERANAS-FBS-SA-015): 10%

抗生素：雙抗

培養(yǎng)條件：37℃，CO2: 5%

傳代方法

收到細胞后，在倒置顯微鏡下觀察細胞生長狀態(tài)：

如果沒長滿，將培養(yǎng)瓶用75%酒精消毒后在超凈臺內更換新鮮培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。

如果細胞已經(jīng)長滿（約80%-90%）則傳代后繼續(xù)培養(yǎng)。

貼壁細胞傳代方法：

1 棄去培養(yǎng)基，用不含鈣、鎂離子的PBS洗1-2次。

2 加1ml 0.25%的胰酶（含0.02%EDTA），讓胰酶與大部分細胞接觸后放入37℃培養(yǎng)箱內，隨時觀察細胞狀態(tài)變化，待細胞大部分變圓后加*培養(yǎng)基終止消化。

懸浮細胞傳代方法：可以直接傳代也可以離心法傳代。

1 直接傳代是讓懸浮細胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清吸掉1/2-2/3，吹打細胞形成細胞懸液后，分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

2離心法傳代是將細胞連同培養(yǎng)液一并轉移到離心管內， 1000rpm，5分鐘，去除上清，加新的培養(yǎng)液到離心管內，吹打細胞形成細胞懸液后，分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

 一般沒有特殊說明，細胞一般是一傳二。

凍存方法

70% *培養(yǎng)基，20%FBS，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

儲存：液氮中長期保存。

注

1 觀察細胞在低倍鏡下觀察，便于整體估計細胞密度。

2 在運輸過程中可能會導致一些貼壁不牢的細胞發(fā)生部分脫落，可離心吹打后重新種入瓶中培養(yǎng)。

3 收到細胞后若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、細胞污染等，請拍照并在三天內與我們。

試管規(guī)格

細胞量

細胞取樣

0.4%臺盤蘭

PBS（1×）

稀釋倍數(shù)

1.5ml

0.5-1×10⁶

10μl

10μl

-

2

2ml

0.5-1×10⁶

10μl

10μl

-

2

5ml

5×10⁶

10μl

10μl

-

2

15ml

10×10⁶

10μl

10μl

-

2

15ml

15-20×10⁶

10μl

10μl

80μl

10

50ml

30-100×10⁶

10μl

10μl

80μl

10