單克隆抗體和多克隆抗體有什么區(qū)別?

單克隆抗體由同一株B細(xì)胞克隆分泌，編碼該抗體的基因序列*一致。只識(shí)別單一抗原表位。

多克隆抗體則是混合體，有動(dòng)物體內(nèi)所有可識(shí)別該抗原的B細(xì)胞分泌。可識(shí)別該抗原上的不同抗

原表位。

單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)與局限性：?jiǎn)慰寺】贵w和多克隆抗體各有其優(yōu)點(diǎn)和局限性，只有對(duì)它們有全面

的了解，才能根據(jù)不同應(yīng)用領(lǐng)域的要求，正確的選擇和應(yīng)用。

  1）單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：

  （1）雜交瘤可以在體外“*”地存活并傳代，只要不發(fā)生細(xì)胞株的基因突變，就可以不斷

的生產(chǎn)高特異性、高均一性的抗體。

  （2）可以用相對(duì)不純的抗原，獲得大量高度特異的、均一的抗體。

  （3）由于可能得到“無*”的均一性抗體，所以適用于以標(biāo)記抗體為特點(diǎn)的免疫學(xué)分析方

法，如IRMA和ELISA等。

  （4）由于單克隆抗體的高特異性和單一生物學(xué)功能，可用于體內(nèi)的放射免疫顯像和免疫導(dǎo)向

治療。

  2）單克隆抗體的局限性：

  (1）單克隆抗體固定的親和性和局限的生物活性限制了它的應(yīng)用范圍。由于單克隆抗體不能進(jìn)

行沉淀和凝集反應(yīng)，所以很多檢測(cè)方法不能用單克隆抗體完成。、

  (2)單克隆抗體的反應(yīng)強(qiáng)度不如多克隆抗體。

  （3）制備技術(shù)復(fù)雜，而且費(fèi)時(shí)費(fèi)工，所以單克隆抗體的價(jià)格也較高。

單克隆抗體的制備過程

過程

1）免疫脾細(xì)胞的制備 制備單克隆抗體的動(dòng)物多采用純系 Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用

抗原的性質(zhì)。免疫方法同一般血清的制備，也可采用脾內(nèi)直接免疫法。

  2）骨髓瘤細(xì)胞的培養(yǎng)與篩選 在融合前，骨髓瘤細(xì)胞應(yīng)經(jīng)過含8-AG的培養(yǎng)基篩選，防止細(xì)胞發(fā)

生突變恢復(fù)HGPRT的活性（恢復(fù)HGPRT的活性的細(xì)胞不能在含8-AG的培養(yǎng)基中存活）。骨髓瘤

細(xì)胞用10%小牛血清的培養(yǎng)液在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，融合前24h換液一次，使骨髓瘤細(xì)胞處于對(duì)

數(shù)生長(zhǎng)期。

  3）細(xì)胞融合的關(guān)鍵:

 1技術(shù)上的誤差常常導(dǎo)致融合的失敗。例如，供者淋巴細(xì)胞沒有查到免疫應(yīng)答。這必然要失敗的

 2融合試驗(yàn)zui大的失敗原因是污染，融合成功的關(guān)鍵是提供一個(gè)干凈的環(huán)境，以及適宜的無菌操

作技術(shù)。

  4）陽性克隆的篩選 應(yīng)盡早進(jìn)行。通常在融合后10天作*次檢測(cè)，過早容易出現(xiàn)假陽性。檢

測(cè)方法應(yīng)靈敏、準(zhǔn)確、而且簡(jiǎn)便快速。具體應(yīng)用的方法應(yīng)根據(jù)抗原的性質(zhì)，以及所需單克隆抗體

的功能進(jìn)行選擇。常用的方法有 RIA法、 ELISA法和免疫熒光法等。其中ELISA法zui簡(jiǎn)便，RIA

法zui準(zhǔn)確。陽性克隆的篩選應(yīng)進(jìn)行多次，均陽性時(shí)才確定為陽性克隆進(jìn)行擴(kuò)增。

  5）克隆化 克隆化的目的是為了獲得單一細(xì)胞系的群體?？寺』瘧?yīng)盡早進(jìn)行并反復(fù)篩選。這是

因?yàn)槌跗诘碾s交瘤細(xì)胞是不穩(wěn)定的，有丟失染色體的傾向。反復(fù)克隆化后可獲得穩(wěn)定的雜交瘤細(xì)

胞株。克隆化的方法很多，而zui常用的是有限稀釋法。

（1）顯微操作法：在顯微鏡下取單細(xì)胞，然后進(jìn)行單細(xì)胞培養(yǎng)。這種方法操作復(fù)雜，效率低，

故不常用。

（2）有限稀釋法：將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的雜交瘤細(xì)胞用培養(yǎng)液作一定的稀釋后，按每孔1個(gè)細(xì)胞接種

在培養(yǎng)皿中，細(xì)胞增值后成為單克隆細(xì)胞系。*次克隆化時(shí)加一定量的飼養(yǎng)細(xì)胞。由于*次

克隆化生長(zhǎng)的細(xì)胞不能保證單克隆化，所以為獲得穩(wěn)定的單克隆細(xì)胞株需經(jīng)2～3次的再克隆才

成。應(yīng)該注意的是，每次克隆化過程中所有有意義的細(xì)胞都應(yīng)冷凍保存，以便重復(fù)檢查，避免丟

失有意義的細(xì)胞。

（3）軟瓊脂法：將雜交瘤細(xì)胞稀釋到一定密度，然后與瓊脂混懸。在瓊脂中的細(xì)胞不能自由移

動(dòng)，彼此互不相混，從而達(dá)到單細(xì)胞培養(yǎng)的目的。但此法不如有限稀釋法好。

（4）熒光激光細(xì)胞分類法：用抗原包被的熒光乳膠微球標(biāo)記雜交瘤細(xì)胞，然后根據(jù)抗原與雜交

瘤細(xì)胞結(jié)合的特異性選出細(xì)胞，并進(jìn)行單細(xì)胞培養(yǎng)。

6）細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇

7）大規(guī)模單克隆抗體的制備   選出的陽性細(xì)胞株應(yīng)及早進(jìn)行抗體制備，因?yàn)槿诤霞?xì)胞隨培養(yǎng)時(shí)

間延長(zhǎng)，發(fā)生污染、染包體丟失和細(xì)胞死亡的機(jī)率增加。抗體制備有兩種方法。一是增量培養(yǎng)法

，即將雜交瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)，在培養(yǎng)液中分離單克隆抗體。該法需用特殊的儀器設(shè)備，一般應(yīng)

用無血清培養(yǎng)基，以利于單克隆抗體的濃縮和純化。zui普遍采用的是小鼠腹腔接種法。選用

BALB/c小鼠或其親代小鼠，先用降植烷或液體石蠟行小鼠腹腔注射，一周后將雜交瘤細(xì)胞接種

到小鼠腹腔中去。通常在接種一周后即有明顯的腹水產(chǎn)生，每只小鼠可收集5～10ml的腹水，有

時(shí)甚至超過40ml。該法制備的腹水抗體含量高，每毫升可達(dá)數(shù)毫克甚至數(shù)十毫克水平。此外，

腹水中的雜蛋白也較少，便于抗體的純化。

意義：

用于以下各種生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)并具有醫(yī)用價(jià)值

（1）沉淀反應(yīng)：Precipitation reaction

（2）凝集實(shí)驗(yàn)：haemaglutination

 （3）放射免疫學(xué)方法檢測(cè)免疫復(fù)合物

（4） 流式細(xì)胞儀：用于細(xì)胞的分型和細(xì)胞分離。

（5）ELISA 等免疫學(xué)檢測(cè)

（6）BIAcore biosensor:檢測(cè)Ab-Ag或與蛋白的

     親和力 。

  (7) 免疫印記（western blotting)

（8） 免疫沉淀：

（9） 親和層析：分離蛋白質(zhì)

（10） 磁珠分離細(xì)胞

（11）臨床疾病的診斷和治療

原理：

B淋巴細(xì)胞在抗原的刺激下，能夠分化、增殖形成具有針對(duì)這種抗原分泌特異性抗體的能力。B

細(xì)胞的這種能力和量是有限的，不可能持續(xù)分化增殖下去，因此產(chǎn)生免疫球蛋白的能力也是極其

微小的。將這種B細(xì)胞與非分泌型的骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞，再進(jìn)一步克隆化，這種克

隆化的雜交瘤細(xì)胞是既具有瘤的無限生長(zhǎng)的能力，又具有產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞的能力，

將這種克隆化的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)或注入小鼠體內(nèi)即可獲得大量的價(jià)、單一的特異性抗體

。這種技術(shù)即稱為單克隆抗體技術(shù)。

依據(jù)原理：細(xì)胞的性。

離體的植物器官、組織或細(xì)胞，在培養(yǎng)了一段時(shí)間后，會(huì)通過細(xì)胞分裂，形成愈傷組織。由高度

分化的植物器官、組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程，稱為植物細(xì)胞的脫分化，或者叫做去分化。

脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官，這個(gè)過程叫做再分化。

再分化形成的試管苗，移栽到地里，可以發(fā)育成完整的植物體。

★愈傷組織（Callus）：原指植物在受傷之后于傷口表面形成的一團(tuán)薄壁細(xì)胞，在組培中則指人

工培養(yǎng)基上由外植體長(zhǎng)出來的一團(tuán)無序生長(zhǎng)的薄壁細(xì)胞。

★脫分化（dedifferentiation）：在組織培養(yǎng)中，不分裂的靜止細(xì)胞，放在一定的培養(yǎng)基上后，

細(xì)胞重新進(jìn)入分裂狀態(tài)。一個(gè)成熟的細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榉稚鸂顟B(tài)的過程叫脫分化。

  ★再分化（redifferentiation）：一個(gè)成熟的植物細(xì)胞經(jīng)歷了脫分化后，能再分化而形成完整

植株的過程。

  ★再分化途徑：1、器官發(fā)生方式（是指在外植體或愈傷組織的不同部位分別獨(dú)立形成莖、芽和

根，它們?yōu)閱螛O性結(jié)構(gòu)，各有維管束與外植體或愈傷組織相連，但在不定芽和不定根之間沒有共

同的維管束將兩者連在一起。）2、胚胎發(fā)生方式（外植體直接或通過愈傷組織或懸浮培養(yǎng)產(chǎn)生

胚狀體。）

  ★胚狀體（embryoid）：是指在組織培養(yǎng)中起源于一個(gè)非合子細(xì)胞，經(jīng)過胚胎發(fā)生和胚胎發(fā)育

過程形成的具有雙極性的胚狀結(jié)構(gòu)。其特點(diǎn)有：1、不同于合子胚，因?yàn)樗皇莾尚约?xì)胞融合產(chǎn)

生。2、不同于孤雌/雄胚，因?yàn)樗皇菬o融合生殖的產(chǎn)物。3、不同于器官發(fā)生方式形成的莖芽

和根，因?yàn)樗?jīng)歷了與合子胚相似的發(fā)育過程且成熟的胚狀體是雙極性結(jié)構(gòu)。

  ★器官發(fā)生途徑：1、莖尖或莖段培養(yǎng)產(chǎn)生腋芽。2、直接不定芽發(fā)生：器官的小塊組織在培養(yǎng)

基上培養(yǎng)直接誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽。3、間接不定芽發(fā)生：器官的小塊組織在培養(yǎng)基上培養(yǎng)后先去分

化形成愈傷組織，再經(jīng)分化誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽或不定根。

  ★胚胎發(fā)生方式：1、直接胚胎發(fā)生（從培養(yǎng)物中的器官組織，細(xì)胞或原生質(zhì)體直接分化成胚，

中間不經(jīng)過愈傷組織）2、間接胚胎發(fā)生（外植體先愈傷化，然后由愈傷組織細(xì)胞分化成熟）

  球型胚（globalembryo）→心型胚（heart-stageembryo）→雷型胚（torpedo-

stageembryo）→子葉型胚（cytoledon-stageembryo）

  ★人工種子：是指利用細(xì)胞的性將離體培養(yǎng)所產(chǎn)生的體細(xì)胞或具有發(fā)育成完整植株能力的

分生組織（胚狀體，莖和莖段）包裹在一層含有營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)并具有保護(hù)功能的外膜內(nèi)形成在適宜條

件下能夠發(fā)育成完整植株的小顆粒。

  結(jié)構(gòu)包括人工種皮，胚狀體（分生組織），人工胚乳。

 ★花粉花藥培養(yǎng)的意義：1、在單倍體細(xì)胞中只有一個(gè)染色體組，表現(xiàn)型和基因型一致，一旦發(fā)

生突變，無論是顯性還是隱性，在當(dāng)代就可表現(xiàn)出來，因此單倍體是體細(xì)胞遺傳研究和突變育種

的理想材料。2、在品種間雜交育種過程中，通過F1代花藥培養(yǎng)得到單倍體后，經(jīng)染色體加倍立

即成為純合二倍體，從雜交到獲得不分離的雜種后代單株只需要2個(gè)世代和常規(guī)育種相比，顯著

縮短了育種年限。

  ★花藥培養(yǎng)步驟（用改良的NLN培養(yǎng)基）：

  F1代花藥→形成小孢子→分離小孢子→形成愈傷組織→形成胚→單倍體植株→純合二倍體

  ↓

  形成胚→單倍體植株→染色體加倍形成純合二倍體

  ★植物組織培養(yǎng)應(yīng)用步驟：1、獲得無菌外植體，建立起無菌培養(yǎng)體系。2、進(jìn)行增殖，不斷產(chǎn)

生不定芽或胚狀體。3、生根培養(yǎng)。4、試管苗移栽。

  ★外植體選擇的原則：1、必須含有活細(xì)胞。2、幼嫩組織所含活躍分裂的細(xì)胞比例高。3、母

珠必須健康并且無任何腐爛或生病的跡象。4、母珠必須活躍生長(zhǎng)并且不會(huì)立即進(jìn)入休眠。

  ★外植體的確定選擇：1、莖尖（園藝植物組織培養(yǎng)中應(yīng)用zui多，繁殖率高，不易發(fā)生遺傳變異

，但取材有限）；2、莖段（采用嫩莖的切段促進(jìn)腋芽萌發(fā)，取材容易）；3、葉（幼嫩葉片組

織通過愈傷組織或不定芽分化產(chǎn)生植株，取材容易，操作方便，但易發(fā)生變異）；4、花球和花

蕾；5、種子、根、塊根、塊莖、花瓣等。