HPB-ALL細(xì)胞
中文名稱：兒童 T 急性淋巴細(xì)胞白血病

1640培養(yǎng)基；10%胎牛血清；1%雙抗；復(fù)蘇5-7天，凍存次日發(fā)貨

1973 年從一名確診患有急性淋巴細(xì)胞白血病 (ALL) 和胸腺瘤的 14 歲男孩的外周血中建立。外顯子組和 RNA 序列數(shù)據(jù)可用（參見參考文獻(xiàn) 18187 和外顯子組序列和 RNA-Seq）圓形至多形細(xì)胞在懸浮液中單獨(dú)或成簇生長，懸浮生長。

STR原始數(shù)據(jù)圖譜，支原體、真菌、細(xì)菌檢測報(bào)告 T25瓶80%密度提供發(fā)貨照片；≥1*106凍存管2支；二選一 1、提供代數(shù)靠前細(xì)胞 2、公司常年有不同買饋贈、等活動形式 3、價格優(yōu)勢 4、售后服務(wù)到位，專業(yè)技術(shù)一對一操作指導(dǎo)

HPB-ALL細(xì)胞培養(yǎng)注意兩點(diǎn)：

1）對細(xì)胞密度要求高，懸浮細(xì)胞是獨(dú)立的，如果密度低，細(xì)胞容易破裂，細(xì)胞膜比較薄

2）對血清要求高，操作者經(jīng)驗(yàn)也要足

細(xì)胞接收處理過程：

1、請顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時 細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

2、收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，不開瓶蓋放培養(yǎng) 箱靜置2-3小時穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3、鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中，重新加入6ml培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2培養(yǎng) 箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存。

4、懸浮細(xì)胞需離心收集處理。抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心3-5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照 說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基）。

（注意：若發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，初次傳代使用T25培養(yǎng)瓶或6cm小皿1傳2）

貼壁細(xì)胞漂浮的處理方法:

注意：部分細(xì)胞由于貼壁松散，會出現(xiàn)運(yùn)輸后漂浮，冬天氣溫低時也會出現(xiàn)細(xì)胞收縮漂浮，屬于不可避免 因素，正確處理后均可以正常生長。

STEP1：將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管，離心收集細(xì)胞(1200rpm約250g-300g離心力，離心3-5min)去除舊培養(yǎng)基;

STEP2：用PBS重懸細(xì)胞，將所有細(xì)胞收集到一個離心管中，再次離心(1200rpm約250g-300g離心力，離心3-5min)去除PBS;

STEP3：加入1ml左右胰酶EDTA溶液，0.25%重懸細(xì)胞，混勻即可，建議震動離心管混勻，避免吹打細(xì) 胞，放入培養(yǎng)箱消化細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞特性決定消化時間(TM3、TM4、293 系列約1~2分鐘);

注意：部分細(xì)胞不能使用胰酶消化，請注意查看細(xì)胞說明書;單顆漂浮的細(xì)胞不需要胰酶處理。

STEP 4：消化好后，用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液，使細(xì)胞團(tuán)分散，迅速加入3-5ml含10%以上血清的培養(yǎng)基混勻終止消化，離心(1200rpm 3min)去除胰酶;

STEP5:加入5ml左右的細(xì)胞培養(yǎng)基混勻，按比例接入無菌培養(yǎng)瓶中;

STEP6:顯微鏡下觀察細(xì)胞是否成均勻分散的單顆細(xì)胞，若有3-5個成團(tuán)的小細(xì)胞團(tuán)可不用重新消化，使之貼壁后待細(xì)胞生長穩(wěn)定后再次傳代消散細(xì)胞。

懸浮細(xì)胞收集的處理方法:

注意：瓶中運(yùn)輸培養(yǎng)基不能繼續(xù)使用，請換用按照說明書培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。培養(yǎng) 懸浮細(xì)胞建議用未經(jīng)TC處理的培養(yǎng)瓶。

STEP1:靜置4h后，請將瓶內(nèi)所有細(xì)胞收集至6個15ml 的離心管110g(1000rpm)  離心3min, 將所有離心 后的細(xì)胞沉淀收集到一個T25 培養(yǎng)瓶內(nèi)，平放10分鐘，鏡下觀察細(xì)胞密度，拍照記錄后放入培養(yǎng)箱中繼 續(xù)培養(yǎng)，第二天密度達(dá)到80%即可傳代；

STEP2:懸浮細(xì)胞半換液處理：將培養(yǎng)瓶豎立在培養(yǎng)箱中靜置1小時左右，輕輕吸掉瓶內(nèi)3ml 培養(yǎng) 基，然后補(bǔ)給3ml 的細(xì)胞培養(yǎng)基，傳代的時候可以直接補(bǔ)給5ml 細(xì)胞培養(yǎng)基，分兩個培養(yǎng)瓶 培養(yǎng)，一般這樣傳代3次左右可以離心傳代一次，去掉死細(xì)胞；

STEP3:懸浮細(xì)胞傳代方法：觀察細(xì)胞無碎片無死細(xì)胞的情況下，建議直接加入新鮮的細(xì)胞培養(yǎng)基直 接分瓶即可。

售后服務(wù)：

1.常溫細(xì)胞為 T25 培養(yǎng)瓶發(fā)貨，若收到細(xì)胞后狀態(tài)差，活率低，請當(dāng)天拍照記錄，發(fā)給技術(shù)支持或 者銷售人員；根據(jù)情況，不能調(diào)整或者調(diào)整培養(yǎng)一周后，狀態(tài)沒好轉(zhuǎn)的，可給予重發(fā)細(xì)胞。

2. 收到細(xì)胞24小時內(nèi)出現(xiàn)細(xì)菌、真菌、霉菌污染給于免費(fèi)重發(fā)。4 8 小 時檢測支原體陽性無條件重發(fā) 。(吸取上清至冰箱保存48小時之后檢測的不算準(zhǔn)確結(jié)果)收到細(xì)胞有污染現(xiàn)象，請于收貨當(dāng)天 及時拍照記錄，提供清晰的照片(照片為原培養(yǎng)瓶未拆封外觀照和顯微鏡下細(xì)胞狀態(tài)的照片);在培養(yǎng) 瓶未開封的情況下，可給予重發(fā)細(xì)胞。

3.若收到細(xì)胞有漏液現(xiàn)象，請于收貨當(dāng)天及時拍照記錄(照片為原培養(yǎng)瓶未拆封外觀照和顯微鏡下細(xì) 胞狀態(tài)的照片);請保留原瓶培養(yǎng)基，并將原瓶培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到一個無菌的容器內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)3天內(nèi)出現(xiàn) 細(xì)胞污染現(xiàn)象，可給予重發(fā)細(xì)胞。

4. 收到常溫細(xì)胞時狀態(tài)無異常，用戶自身操作導(dǎo)致細(xì)胞污染、細(xì)胞狀態(tài)不佳、細(xì)胞凍存后復(fù)蘇不活 的，不予免費(fèi)重發(fā)。

5. 細(xì)胞培養(yǎng)時，使用其他非細(xì)胞培養(yǎng)體系外源試劑處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，不予免費(fèi)重發(fā)。

6.非細(xì)胞出廠質(zhì)量問題，客戶自身操作導(dǎo)致的細(xì)胞死亡，自收貨日起一個月內(nèi)可以申請低價二次購 買折扣(原代細(xì)胞除外)。

7.細(xì)胞相關(guān)實(shí)驗(yàn)受多種因素影響，非細(xì)胞鑒定問題，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不理想的，不予退/換細(xì)胞。

常溫細(xì)胞收貨注意事項(xiàng)：

觀察是否有異?，F(xiàn)象

收到貨后如發(fā)現(xiàn)有任何異?，F(xiàn)象，如污染，漏液，細(xì)胞漂浮等，請拍照記錄，并及時聯(lián)系我們銷售 人員或者技術(shù)支持。

將培養(yǎng)瓶放置培養(yǎng)箱中靜止

用75%酒精擦拭瓶身，封口膜可以不用撕去，將 T25 瓶置于培養(yǎng) 箱中靜置2~4h 后進(jìn)行操作，(注意：懸浮細(xì)胞請將培養(yǎng)瓶豎立在 培養(yǎng)箱中靜置),在此期間，請查看說明書以確定細(xì)胞屬性。

觀察細(xì)胞密度是否超過80%

觀察細(xì)胞密度，若超過80%則可正常傳代處理(有些原代細(xì)胞不 可傳代，請仔細(xì)查閱細(xì)胞說明書并根據(jù)實(shí)際情況決定),傳代推 薦比例1:2。

注意：傳代比例指的是同等大小容器的前提下，如需更換培養(yǎng)容器，則需換算培 養(yǎng)容器貼壁面積，例如：一個T25 瓶的貼壁面積相當(dāng)于1個6cm 的皿，1個10cm  的皿的貼壁面積相當(dāng)于3個T25瓶，1個T75瓶的貼壁面積相當(dāng)于3個T25 瓶。

觀察細(xì)胞密度，若細(xì)胞密度不到80%,建議吸出運(yùn)輸培養(yǎng)基，加入5ml 細(xì)胞培養(yǎng)基，培養(yǎng)到可傳代密度。

特殊細(xì)胞收到注意事項(xiàng)

部分細(xì)胞由于貼壁不牢在運(yùn)輸過程中發(fā)生細(xì)胞脫落，這是正?，F(xiàn)象，正確處理后都可以正常生長。

1、將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管，離心收集細(xì)胞（1200rpm3-5min）去除舊培養(yǎng)基；

2、用PBS重懸細(xì)胞，將所有細(xì)胞收集到一個離心管中，再次離心（1200rpm3-5min）去除PBS；

3、加入1ml左右0.25%胰酶重懸細(xì)胞，混勻即可，不能吹打太多次，放入培養(yǎng)箱消化，根據(jù)細(xì)胞特性決定消化時間（約1~2分鐘）；

4、消化好后，用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液，使細(xì)胞團(tuán)分散，迅速加入3-5ml培養(yǎng)基混勻以終止消化，離心（1200rpm3-5min） 去除胰酶；

5、加入5ml左右細(xì)胞相應(yīng)的培養(yǎng)基混勻，按比例接入無菌培養(yǎng)瓶/皿中；

6、顯微鏡下觀察看細(xì)胞是否成均勻分散的單顆細(xì)胞，若有3-5個成團(tuán)的小細(xì)胞團(tuán)可不用重新消化，使之貼壁，待細(xì)胞生長穩(wěn)定后再 消散細(xì)胞。